在进行WB实验时，最让人头疼的是什么？无疑是条带漂移和数据崩溃，而深入一查，内参失灵可能是罪魁祸首！简单来说，内参就像细胞中的“稳定打工人”，其表达量始终如一，专门用于校准样品量和消除误差。没有合适的内参，半定量的结果就像没有秤砣的秤——全靠运气！

✅首先，关注分子量——理想的目的蛋白与内参之间差距需大于5kD，才能避免条带叠加成“情侣装”。

✅其次，定位很重要——如果做核蛋白实验却使用β-actin，显然是不妥的！β-actin在细胞核内几乎不存在，建议使用PCNA（29kD）或Histone H3（17kD），效果更佳。

✅此外，要考虑组织特性——在脂肪组织中，β-actin的表达量可能低得让人心痛，此时换用GAPDH会更为合适；而在肌肉样本中，tubulin可能出现问题，反而选择actin会更加稳妥。

同一克β-actin，在心肌样本中，N端抗体可能会完全消失，而C端抗体却能稳定地产生条带！因此，选购抗体前一定要仔细查看抗原位点，避免“组织特异性”问题出现，确保实验顺利进行。

全细胞或胞浆样本可以选用β-actin或GAPDH；对于核蛋白则应选择PCNA或Histone H3；大分子蛋白建议使用β-tubulin；特殊样本记得先查文献再下单！选择合适的内参，才能确保WB实验结果的稳定性！

想要科研路上更加顺利，记得选择[不朽情缘MG]的高质量内参，让每个实验更具可信度！