全套操作约需1小时,涉及匀浆、细胞裂解、去除蛋白和DNA纯化等步骤,具体流程如下:

一、匀浆与细胞裂解
根据不同实验材料,需采用相应的匀浆步骤,具体如下:
1. 从动物组织中提取基因组DNA
使用研钵进行匀浆时:
- 取1~100mg的动物或人组织置于冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。注:对于以下组织,请使用液氮进行研磨直至粉末状:
A. 富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。
B. 富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C. 富含角质蛋白的组织或坚硬的组织(如骨骼等)。 - 加入650μl的SolutionA和9μl的RNaseA1,温和研磨30秒。注:使用上文材料时,请在加入SolutionA及RNaseA1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
- 将650μl研磨好的组织匀浆液移至CollectionTube中。如匀浆体积不足650μl,请补充SolutionA至650μl,65℃保温5分钟。
使用研磨棒进行匀浆时:
- 取1~100mg的动物或人组织移入冰浴预冷的CollectionTube中,用研磨棒快速研磨至糊状。
- 加入350μl的SolutionA和9μl的RNaseA1后,用研磨棒快速研磨成匀浆。
- 加入350μl的SolutionA将研磨棒上的匀浆冲入CollectionTube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。
2. 从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA
- 根据下表称取适量的新鲜植物材料(如使用冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品完全冷冻后快速研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以避免材料融化。
植物材料类型 | 使用量 |
植物花、叶片 | 10~100mg |
植物茎 | 60~240mg |
植物根 | 80~240mg |
植物种子 | 80~240mg |
注:如选择植物根、种子等样品,由于其基因组DNA含量很低,需要使用超过表格中所示的用量。在此情况下,请分两管进行步骤1~6的实验操作,步骤7再将各管溶液合并入同一SpinColumn进行过滤。
若从培养的植物细胞提取基因组DNA,收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150μl水充分悬浮后移入研钵中,加入液氮后快速研磨至粉末状。注:样品研磨应充分,否则将严重影响基因组DNA的收率。
- 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700μl的SolutionA和12μl的RNaseA1,用力碾磨30秒。
- 收集650μl研磨好的组织匀浆移至CollectionTube中。如匀浆体积不足650μl,请补充SolutionA至650μl,65℃保温15分钟。
注:处理富含纤维的植物根/茎或富含淀粉、蛋白质的种子时,可延长水浴时间至60分钟。
3. 从全血中提取基因组DNA
- 取10~250μl的全血(含抗凝剂)加入CollectionTube中。
- 加入500μl的SolutionA。
- 加入1μl的RNaseA1,激烈振荡15秒后冰浴5分钟。注:人与动物的抗凝全血一次处理量为≤250μl;禽类、两栖类的抗凝全血一次处理量为≤10μl。
4. 从培养细胞中提取基因组DNA
在使用悬浮培养的动物细胞时:
- 使用CollectionTube收集1×105~1.5×107的细胞悬浮液,5,000rpm离心5分钟后弃上清(细胞培养液)。
- 加入150μl的灭菌蒸馏水或PBS以悬浮细胞。
- 加入500μl的SolutionA和8μl的RNaseA1,激烈振荡15秒后室温静置1分钟。
使用不朽情缘MG提供的这些详细操作步骤,能有效提高您的实验效率与结果准确性。