不朽情缘MG的感染预实验以24孔培养板为基础，进行目的细胞与工具细胞的感染筛选。工具细胞可选用293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）或其他细胞。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪及枪头、EP管、细胞计数板、冰盒、废液缸等。根据目的细胞的特性，适当使用Polybrene。

第1天：细胞准备

首先，将细胞培养至对数生长期，并使用胰酶消化后计数。测定细胞密度，确保每孔接种5×10⁴个细胞，添加500µL的细胞培养液。通常情况下，H1299或293T细胞在感染后第3天可达到80%-90%的融合度。接种目的细胞时，请根据细胞实际生长速度调整接种量，以确保其在第3天达到80%-90%融合度。

第2天：感染准备

(1) 准备慢病毒颗粒：计算所需的慢病毒颗粒量，从-80℃的储存中取出并在冰浴中融化。

(2) 感染目的细胞：从培养箱中取出细胞，在显微镜下观察细胞状态及融合度。当细胞状态良好时，开始实验：

A. 使用移液枪吸去24孔板中的旧培养液，加入新的完全培养液；

B. 向细胞中加入计算好的慢病毒颗粒液，平放培养板，以轻柔划8字的方式混匀；

C. 混匀后，将细胞培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

第3天：培养液更换

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，重新添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，继续培养。根据不同的目的细胞，适当调整感染时间，部分细胞的感染时间不宜超过12小时。

第4天：观察细胞状态

继续培养细胞，观察是否有异常情况出现。

第5天：评估感染效率

在观察感染效率时，将24孔培养板盖紧，使用70%乙醇消毒其外部。在倒置荧光显微镜下观察荧光，并拍照记录，初步估计慢病毒颗粒对细胞的感染效率。如果慢病毒颗粒携带的基因表达时间较长，建议在72、96小时后观察荧光表达。

通过上述过程，结合荧光表达情况，可从MOI梯度中初步探索目的细胞的最佳MOI值。利用不朽情缘MG的技术优势，不断优化实验方案，以提升感染效率和细胞研究质量。