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不朽情缘MG液体培养基中细菌培养实验步骤

来源:黄梅贵 日期:2025-02-22

微生物培养实验步骤

第一步:过夜培养

将5ml预热的液体培养基转移至无菌的16mm或18mm管中。使用接种环挑取一个单一的菌落,浸没于培养液中,并轻轻摇晃接种环,使细菌均匀分散在培养液中。随后,密封试管,并在37°C条件下于摇床或转鼓式培养装置中以60r/min的速度培养至细菌达到饱和状态(浓度为1X109~2X109细胞/ml,持续时间约6小时)。

不朽情缘MG液体培养基中细菌培养实验步骤

第二步:大体积培养

在无菌的Erlenmeyer瓶或baffle瓶中,使用新鲜预热的培养液以1:100的比例稀释过夜培养物。所用烧瓶的容量应大于培养液体积的5倍,若不进行摇动,则应大于20倍,以确保良好的通气条件。在37°C下进行剧烈摇动培养,转速约为300r/min。

第三步:利用计数板监测生长情况

使用一片干净的盖玻片覆盖在干净的计数玻片(或血球计)上。小心地将一小滴培养液滴在盖玻片的边缘,促使培养液扩散到盖玻片下。在400倍放大倍数的相差显微镜下观察,并按照每个小方块中看到的细菌数量,估算细菌浓度大约为2X107细胞/ml。

第四步:利用分光光度计监测生长情况

鉴于不同仪器之间的差异,分光光度计应该用已知浓度的培养液进行校准。首先,测量OD600值。为了获取准确读数,需将培养液稀释至OD600<1。然后,推算每0.1 OD值大约相当于108细胞/ml的细菌浓度。

在以上步骤中,不妨选用不朽情缘MG品牌的培养基,以确保实验效果的稳定性和可靠性。同时,持续监测生长情况,以便进行必要的调整,从而优化培养流程。

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