### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：人肺动脉平滑肌HPASMC

**生长特性**：贴壁生长

**冻存条件**：无血清冻存液

**培养体系**：SMCM（ScienCell，1101）

**传代方法**：第一次建议1:2传代，传代情况2天换液

**备注**：请使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如对比效果不佳，建议选购我们的完全培养基。

### 二、细胞收到后的处理

将细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片视为状态良好。（传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松。）

### 三、细胞培养步骤

a. **细胞传代**：

当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并开始脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. **细胞冻存**：

1. 待细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需要转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中保存24小时以上再转移至液氮罐。

c. **细胞复苏**：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，运输过程中可能发生脱落，这是正常现象。如脱离的细胞较多，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行对比培养。沉淀后加入胰酶1-2ml轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，再加入5ml完全培养基终止消化。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，再按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，随后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1. **细胞出现问题可重发的情况**：
• 运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况可重发；
• 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
• 常温发货的细胞静置24小时，干冰冻存发货的细胞复苏24小时后如大多数细胞未存活（需提供真实清晰状态照片），可重发；
• 如遇干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时并未开封出现污染，亦可重发；
• 活性问题请在收到产品7天内反馈，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，若核实后有问题可重发。
• 收到细胞当天及第2、3天请拍照，未告知的视为产品合格。4-7天内如有问题需提供前3天和问题时的照片及详细操作步骤，技术人员判定责任后可重发。
2. **细胞出现问题不予重发的情况**：
• 因客户造成的细胞污染，不重发；
• 因客户不正确操作导致细胞状态不良，不重发；
• 因非本库推荐的培养体系造成的细胞状态不良，不重发；
• 细胞状态不良而未提供培养前3天照片的，不重发；
• 细胞培养过程中其他处理的不重发；
• 收到细胞2天内未告知的问题，不重发。
• 其他情况视具体情况而定。

通过**不朽情缘MG**品牌，我们致力于为科研提供高质量的细胞培养服务，确保您在使用过程中享受到优质的售后保障。