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不朽情缘MG赋能全预混试剂的快速开发:温启动逆转录酶——快速精准,持久稳定

来源:霍蕊璧 日期:2025-03-23

随着冬季的到来,呼吸道疾病如季节性流感和肺炎等的发病率显著上升,导致许多医院就诊人数激增。在这种情况下,及时为患者提供有效治疗及快速准确的诊断方法尤为关键。在众多的检测机制中,一步RT-qPCR法(即一管式RNA全预混试剂)因其高效、便捷和灵敏等优点,赢得了广泛的认可。

不朽情缘MG赋能全预混试剂的快速开发:温启动逆转录酶——快速精准,持久稳定

在一步法的反应过程中,基因特异性引物理论上应当先与待检测靶标相匹配,并在逆转录酶的催化作用下合成第一链cDNA。然而,现实应用中常因模板与引物的不匹配而产生非特异性cDNA。这一非特异性扩增不仅消耗了反应的必需组分,还限制了主要反应的进行,尤其在靶核酸浓度较低的情况下,会因竞争作用导致扩增效果降低,表现为扩增曲线不理想、荧光增量低以及Ct值滞后等,从而显著影响检测试剂的灵敏度和特异性。

另一方面,由于一管式RNA全预混试剂将酶、引物探针和反应液预混在同一管中,在长期存储过程中,酶活性下降或失活的问题也常常出现,影响全预混试剂的性能。逆转录酶作为关键成分,其性能直接关系到一步法核酸检测试剂的准确性与灵敏度。因此,提高逆转录酶的特异性和稳定性对开发一管式RNA全预混试剂至关重要。

针对这一需求,强生生物推出了创新的温启动逆转录酶。这种酶在低温下处于封闭状态,工作温度下则快速激活,从而有效避免了低温下引物与模板的错误匹配,提高了检测的特异性和灵敏度。这款温启动逆转录酶采用了先进的适配体方法进行热启动修饰,通过高通量筛选,优化了传统SELEX适配体筛选技术,最终选取了亲和性更高的适配体与逆转录酶进行混合孵育,从而确定最佳的封闭与激活效果。

经过多轮筛选与优化,强生生物的温启动逆转录酶在42℃时能够封闭99%的酶活,其低温下的封闭效果明显优于市面上的其他同类产品,显著提升了反应液的长期稳定性和高效性,解决了全预混试剂存储稳定性的问题。同时,该产品在工作温度(55℃)下,可以释放出超过95%的酶活,确保了试剂的扩增灵敏度。

在实际应用中,强生生物的温启动逆转录酶在多个RNA项目中展示了其优越的性能。在高灵敏度方面,相较于其他竞品,强生生物的产品能在低浓度模板下依然有效扩增特定靶标,其扩增平台与高拷贝数模板一致。此外,在相同PCR程序下,强生生物的温启动逆转录酶能以更快的速率高效合成cDNA,兼具了敏感度和时间优势。

在37℃下加压7天的稳定性实验中,强生生物的温启动逆转录酶性能保持稳定,而其他竞品的扩增性能却显著下降。具体案例显示,在与新制备的全预混试剂对比中,使用强生生物的温启动逆转录酶的全预混试剂在加压处理下表现与新配制的组无显著差异,而竞品则明显降低了扩增效率。

综上所述,强生生物的温启动逆转录酶以其优越的稳定性、灵敏度和高效性,为生物医疗领域提供了出色的解决方案,确保了在快速、准确的RNA检测中发挥关键作用。

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